Systém
Real-Time PCR (polymerázová reťazová reakcia v reálnom čase) je tvorený
vymeniteľnými optickými modulmi CFX96
a CFX384,
gradientovými termocyklérmi (C1000), počítačovou zostavou a programovým
balíkom na spracovanie HRM analýzu (vysoké rozlíšenie teploty denaturácie DNA)
pre CFX96. Modul CFX96 umožňujú
presné rozlíšenie a stanovenie množstva cieľovej molekuly (DNA, cDNA,
alebo RNA). Optický systém s veľkou presnosťou a citlivosťou spracováva
každú z 96 pozícií, po jednotlivých cykloch PCR. Celkom päť rôznych cieľov
v jednej skúmavke zachytáva CFX96, čo sa využíva pri Multiplex PCR. Termocyklér
C1000 so šiestimi od seba nezávislými ohrievacími a chladiacimi jednotkami umožňuje
veľmi rýchlo meniť teplotu bloku a súčasne zabezpečiť jednotnú teplotu na
povrchu celého bloku.
V Real-Time PCR sa používajú fluorescenčné farbivá, ktoré (a) nie sú špecifické voči poradiu nukleotidov DNA (SybrGREEN a EvaGREEN a ďalšie) a (b) špecifické DNA próby (TaqMan próby). Uplatnenie systému je pri (a) presnom a rýchlom vyhodnocovaní génovej expresie, (b) HRM analýze mutácií, DNA metylácie, DNA odtlačkov, heterozygozity, alel v populácii, haplotypu alebo mapovaní DNA, (c) detekcii hnRNA, (d) sledovaní polymorfizmu na úrovni nukleotidov (SNP) a (e) analýze poškodenia DNA. |